使用Alt-R HDR donor blocks與Alt-R HDR enhancer於大片段基因同源定向修復knock-ins之改善方法

發佈日期 : 2023 . 10 . 16
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生醫商品化中心  周玟伶、廖佑倫

CRISPER基因组编輯(genome editing)技術,主要透過單鏈嚮導RNApexels-fayette-reynolds-ms-11198495.jpg (644 KB)single guide RNAsgRNA)識别特定序列,讓Cas9內核酸酶在DNA上切割,使得雙股DNA斷裂後,進而以DNA修復機制加以編輯,當利用非同源末端接合機制(non-homologous end joiningNHEJ)來修復DNA斷點,容易發生非專一性缺失或插入而造成框移突變(frameshift),於是可達到基因剔除的目的;

另一方面當利用donor DNA進行同源重组(homologous recombination),針對斷點附近的基因序列進行同源定向修復(homology-directed repairHDR),便可修正基因(或造成特定突變)或是插入特定基因序列。本演講介紹IDT如何藉由改善試劑與設計,在研究上有效提高同源定向修復的效率。 

    Alt-R CRISPER系統中,大片段基因同源定向修復的donor DNA包括plasmidlinear ssDNAlinear dsDNA,其中linear dsDNA具有高度的修復效率,細胞毒性不若plasmid高,花費與反應時間也較linear ssDNA低,唯獨脫靶嵌入(off-target integration)的風險較linear ssDNA略高,為解決此問題,IDT針對同源定向修復試劑的組成加以改善,除了原本的Alt-R donor oligosMegamer ssDNA fragments,另外加入Alt-R HDR donor blocks修飾修復模板(repair template),以及小分子Alt-R HDR enhancer V2調節修復路徑。(完整文章請至檔案下載專區的產業透析報告,登錄會員後下載)

基因編輯國際研討會-系列報導二

講題:使用Alt-R HDR donor blocksAlt-R HDR enhancer

           於大片段基因同源定向修復knock-ins之改善方法

(Improved method for large HDR knock-ins using Alt-R HDR blocks and Alt-R HDR enhancer V2)
講者/單位:Dr. Edward Wong/Integrated DNA Technologies (IDT)